هدف آزمایش : تفکیک باکتریهای گرم مثبت از گرم منفی

وسایل مورد نیاز : لوپ حلقوی، لام، قطره چکان، چرا غ آزمایشگاهی، باکتری اشریشیا کُلی E.coli ، باکتری استافیلوکوکوس اورئوس Staphylococcus aureus ،سینی رنگ آمیزی

1- یک قطره آب روی لام می گذاریم.

2- به وسیله لوپ استریل (با قراردادن لوپ روی شعله تا زمانی که قرمز شود سپس از شعله دور کرده صبر می کنیم تا سرد شود). مقداری نمونه ازمحیط کشت برمی داریم در قطره آب می گذاریم و پهن می کنیم.

3-لام را معرض هوا خشک می کنیم از روی شعله عبور می دهیم تا فیکس شود.

4- چند قطره کریستال ویولیت اضافه می کنیم.

5-بعد از یک دقیقه لام را با آب مقطر شستشو می دهیم.

6-  لوگول  را اضافه می کنیم یک دقیقه صبر می کنیم.

7- شستشو با آب مقطر.

8- شستشو با الکل.

9- چند قطره سافرانین یا فوشین اضافه می کنیم یک دقیقه صبر می کنیم.

10- به وسیله آب مقطر شستشو می دهیم چند لحظه صبر می کنیم تا خشک شود سپس با میکروسکوپ بررسی می کنیم.

کریستال ویولت در دیواره باکتری نفوذ می کند و با لوگل تشکیل کمپلکس می دهد سپس شستشو توسط الکل باعث می شود که منافذ دیواره باکتر ی گرم مثبت که مقدار موکو پپتید  زیادی در دیواره دارد کوچک شود و در واقع دیواره اب گیری  شود که در نتیجه ان مولکول بزرگ نمی تواند از دیواره عبور کند پس باکتری گرم مثبت در اثر شستشو رنگ خود را از دست نمی دهد پس ابی می مانند بعضی باکتری ها که گرم منفی هستند موکو پپتید کم  اما لیپید یا چربی زیاد دارند چربی دیواره توسط الکل شسته می شود منافذ بزرگ ایجاد می شود که در نتیجه ان کمپلکس می تواند از ان عبور کند و رنگ نخواهد داشت پس به لام رنگ سافرانین یا فوشین اضافه می شود که در نتیجه ان به رنگ قرمز در خواهد امد.

باکتری استافیلو کوکوس اورئوس کوکسی (کروی) گرم مثبت G⁺ به  رنگ آبی یا بنفش یا سیاه دیده می شود. و باکتری اشرشیا کلی باسیل(میله ای) گرم منفی G⁺  که  به رنگ قرمز یا صورتی خواهد بود.